Immunoblot

Anodenpuffer l

7.266 g  Tris Base

20 ml    Methanol

ad 200 ml mit Aqua a.i.; pH kontrollieren (um pH 10.4)

Anodenpuffer ll

1.514 g  Tris Base

50 ml    Methanol

ad 500 ml Aqua a.i.; pH kontrollieren (um pH 10.4)

Kathodenpuffer

1.514 g  Tris Base

1.501 g  Glycin (oder 40mM 6-Amino-n-Capronsäure)

50 ml    Methanol

ad 500 ml Aqua a.i.; pH kontrollieren (pH 9.4)

Vorbereitung

15 min   Gel in Katnodenpuffer äquilibrieren

15 s     PVDF-Membran mit Methanol durchnässen

2 min    Membran in Aqua a.i.

10 min   Membran in Anidenpuffer II äquilibrieren

Blot-Zusammensatzung

Kathode

3 Blatt Filterpapier mit Kathodenpuffer

Gel

Membran

1 Blatt Filterpapier in Anodenpuffer ll

2 Blatt Filterpapier in Anodenpuffer l

Anode

Stromstärke 1.2 mA/cm2, Dauer 1 Std

Blocking-Puffer

1% Polyvinylpyrrolidon 40,000

0.05 % Tween 20

in PBS