Thrombozytenaktivierung                   19.11.01

ADP

0,2mM    ADP in PBS. Rechne FW=450 g/mol  Sigma A2754

PBS/Formalin/Azid

1%       Paraformaldehyd

0.1%     Natriumazid

PBS

Blutabnahme

9 ml     Blut

1 ml     Natriumcitrat 0,11 M

 

sofort 100µl Blut ad 1000µl PBS/Formalin/Azid, 4°C

Plättchenreiches Plasma

20min    1000 RPM, 20°C abzentrifugieren

sofort 100µl PRP ad 1000µl PBS/Formalin/Azid, 4°C

Plättchenaktivierung

450µl    PRP

50µl     ADP-Lösung

 

mischen, 5min bei RT inkubieren

 

100µl ad 1000µl PBS/Formalin/Azid, 4°C

 

Färbung

1200g    5 min abzentrifugieren

Sediment in 1ml PBS 0.1% Azid resuspendieren

1200g    5 min abzentrifugieren

Sediment in 1ml Färbemedium resuspendieren

 

20µl Antikörper

50µl Zellsuspension

 

mischen, 20 min bei RT inkubieren

 

1x waschen bei 1200g, 5min mit PBS/Azid

 

Messen im Durchflußcytometer